 |
أوّل طاق CDNA تأليف عدة R1011/R1012 عكس Transcriptase PCR كاشف
تفاصيل المنتج:
| مكان المنشأ: | الصين |
| اسم العلامة التجارية: | GDSBio |
| إصدار الشهادات: | / |
| رقم الموديل: | R1011/R1012 |
شروط الدفع والشحن:
| الحد الأدنى لكمية: | 1box |
|---|---|
| تفاصيل التغليف: | صغير يوزّع مجموعة أو شحن أو oem |
| وقت التسليم: | 8work يوم |
| شروط الدفع: | L/C، D/A، D/P، T/T، ويسترن يونيون، MoneyGram |
| القدرة على العرض: | 100 صندوق/صندوق لكلّ يوم |
|
معلومات تفصيلية |
|||
| قط. ما من.: | R1011/R1012 | تركيز: | R1011 (20 rxns),R1012 (100 rxns) |
|---|---|---|---|
| مظهر: | عديم لون | مجموعة: | عكسيّ Transcriptase PCR كاشف |
| نشاط: | ممر | تضخيم إمكانية: | / |
| علامة تجاريّة يطبع: | مع علامة تجاريّة يطبع | نقل مجموعة: | يحزم |
| طاقة الإنتاجية: | 100 صندوق/صندوق لكلّ يوم | تخزين شرط: | مخزن في -20°C |
| تسليط الضوء: | 20 rxns Reverse Transcriptase PCR Reagents,100 يعكس rxns Transcriptase PCR كاشف,20 rxns أوّل طاق cdna تأليف عدة,100 rxns Reverse Transcriptase PCR Reagents,20 rxns first strand cdna synthesis kit |
||
منتوج وصف
rt - PCR عدة
لبحث إستعمال فقط
قط رفض. R1011, 20 rxns
قط رفض. R1012، 100 rxns
عنصر من العدة
| عنصر | R1011 (20 rxns) | R1012 (100 rxns) |
| M-MLV (200U/μl) | 20 μl | 100 μl |
| RNasin (40U/μl) | 12 μl | 60 μl |
| Oligo(dT)15 (50μM) | 20 μl | 100 μl |
| عشوائيّ hexamer كبسولة تفجير (50μM) | 20 μl | 100 μl |
| 5× rive مصد | 80 μl | 400 μl |
| libre ddH2 o | 1 ml | 1 ml × 5 |
| dNTPs(10mM each) | 50 μl | 250 μl |
تخزين
كلّ عنصر من العدة سوفت كنت خزّنت في -20°C. كتيف دعم تحكم rna في -70°C لتخزين طويل.
وصف
RT-PCR جعلت عدة أن يصطنع rive cDNA من ييصفّي مبلمر (a)+أو يجمل rna. ال RT-PCR يسلّم عدة ل RT-PCR يزيد cDNA عائد ماليّ، حساسية عال، ونسخة بالطول أو الحجم الطبيعي في شكل ملائم. أنت تحصل all of the عنصر أنت تحتاج لناجح rive cDNA تأليف، ينقذ وقتك ويضمن نجاحك مع كلّ تجربة. العدة عكس Transcriptase صيغة ال M-MLV rt أنّ يتلقّى يكون هندست أن يقلّل RNase h نشاط وزوّدت يزيد إستقرار حراريّ. استعملت الأنزيم أن يصطنع cDNA في درجة حرارة مدى ال42-55°C، يزوّد يزيد نوعية، عائد ماليّ higher cDNA، وأكثر منتوج بالطول أو الحجم الطبيعي من آخر transcriptase عكسيّ.
تطبيق
أوّل طاق cDNA تأليف ل RT-PCR
بناء من cDNA مكتبة
one-step RT-PCR
إمتداد مبتدأ
بطاقة مهمّ
يتفادى ribonuclease تلوث
rna نقاوة ونزاهة أساسيّ لتأليف من cDNA بالطول أو الحجم الطبيعي. rna يستطيع كنت حقّرت ب RNase a، أيّ يكون ملوث ثابت جدّا يؤسّس في أيّ مختبر بيئة. اختبرت كلّ عنصر من العدة يتلقّى يكون بصرامة أن يضمن أنّ هم libre. أن يمنع تلوث على حدّ سواء المختبر بيئة وكاشف، كلّ يعدّ حل ينبغي كنت حرّ من RNases. توصية العامة أن يتفادى RNase تلوث:
- صدق festin كلّ أنبوب وماصّة طرف أن يكون استعملت في cDNA تأليف أو إستعمال labware libre.
- ارتديت قفاز عندما يعالج rna وكلّ كاشف، كجلد مصدر عاديّ RNases. غيّرت قفاز غالبا.
- استعملت كاشف libre، بما في ذلك ماء عالي الجودة (e.g.، traiter ماء).
- استعملت RNase صادّ، مثل Dongsheng RNasin (#R2011) أن يحمي rna من النشاط RNases.
- حافظت كلّ عدة عنصر بإحكام يختم عندما not in use. حافظت كلّ أنبوب بإحكام يغلق أثناء العكسيّ نسخة تسجيل ردّ فعل.
طبعة rna
rna إجماليّ خلويّ يعزل بطريقة القياسية مناسب لإستعمال مع العدة. ييصفّي rna ينبغي كنت حرّ من ملح، معدن أيون، إيثانول وفينول أن يتفادى يمنع ال cDNA تأليف ردّ فعل. أثر ملوث يستطيع كنت أزلت بإيثانول ترسيب من الrna يتبع بإثنان غسل من الكريّة طينيّة مع برد 75% إيثانول. ل RT-PCR تطبيق، طبعة rna ينبغي كنت حرّ من dna تلوث. قبل cDNA تأليف، rna يستطيع كنت عاملت مع {upper}dnase i أن يزيل أثر مبلغ الdna. {upper}dnase i ينبغي كنت نلت بالمستعمل. دائما أنجزت تحكم (sans) ردّ فعل أيّ يتضمّن كلّ عنصر ل RT-PCR باستثناء العكسيّ transcriptase أنزيم.
RNase h هضم
الحساسية من ال PCR خطوة يستطيع كنت زدت (خصوصا لطبعة طويل) ب يزيل الrna طبعة من ال cDNA: rna جزيء هجيني بهضم مع RNase h بعد rive تأليف. سيحقّر وجود الRNase h أثناء rive تأليف الطبعة mRNA، resulting in ينخفض بالطول أو الحجم الطبيعي cDNA تأليف وينخفض عائد ماليّ من rive cDNA.
كبسولة تفجير
تأليف من أوّل طاق cDNA يستطيع كنت شحنت مع إمّا oligo (dT) 15 كبسولة تفجير، كبسولة تفجير عشوائيّ أو كبسولة تفجير spécifique.
يشحن Oligo (dT) 15 cDNA تأليف من المبلمر (a) ذيل حاضر في ال 3'- نهاية من mRNA eukaryotic. يبدأ كبسولة تفجير عشوائيّ cDNA تأليف من الإجماليّ rna السّكان (rRNA و mRNA). لذلك، ينتج يستعمل كبسولة تفجير عشوائيّ لأوّل طاق تأليف في تعقيد عظيم من ال يلد cDNA يقارن مع ال oligo (dT) 15 كبسولة تفجير. ونتيجة لذلك، الحساسية ونوعية من لاحق PCR ردّ فعل يمكن كنت قلّلت. مهما، هناك عدّة تطبيق حيث هو يكون مفيد أن يستعمل كبسولة تفجير عشوائيّ، مثل cDNA تأليف يستعمل mRNAs دون مبلمر (a) ذيل، أو cDNA تأليف يستعمل مبلمر (a) - يغني rna عينة.
استعملت كبسولة تفجير spécifique أن يصطنع cDNA خاصّ من بركة من إجماليّ rna أو mRNA وينبغي كنت نلت بالمستعمل.
أوّل طاق cDNA تأليف إجراء
الأوّل طاق cDNA ردّ فعل يستطيع كنت أنجزت كردّ فعل فرديّ أو ك sery من ردّ فعل مواز مع مختلف rna طبعة. لذلك، الردّ فعل خليط يستطيع كنت أعدّت ب يضمّ كاشف على انفراد أو مزيج رئيسيّ يحتوي all of the عنصر ما لم طبعة rna يستطيع كنت أعدّت. depending on البنية من الrna طبعة، steps منفصل ل rna مسخ وكبسولة تفجير annealing يمكن حسنت RT-PCR نتيجة.
بروتوكول
i. أوّل طاق cDNA تأليف
1. أضفت الكاشف تالي داخل عقيم، أنبوب libre على جليد في ال يشير أمر:
| طبعة rna |
مبلمر (a) mRNA أو rna خاصّ |
1-5 μg |
| كبسولة تفجير |
oligo (dT)15 primer أو عشوائيّ hexamer كبسولة تفجير |
1 μl 1 μl |
| traiter ماء | to 12.4 μl | |
| حجم الاجمالي | 12.4 μl | |
2. مزجت بلطف، طردت بإيجاز وحضنت في 70°C ل 5 min. قشعريرة على جليد، فتلت إلى أسفل ووضعت القنينة إلى الخلف على جليد.
3. أعدّت التالي cDNA تأليف مزيج، أضفت العنصر تالي في ال يشير أمر:
| 5× rive مصد | 4 μl |
| dNTPs (10 mm لكلّ واحد) | 1 μl |
| RNasin | 0.6 μl |
| M-MLV | 1 μl |
4. مزيج بلطف ونابذة بإيجاز.
5. حضنت ل oligo (dT) 15، ل 60 min في 42°C. ل hexamer عشوائيّ يحضن يشحن تأليف، ل 60 min في 37°C.
6. أنهيت الردّ فعل ب يسخّن في 70°C ل 5 min.
العكسيّ نسخة تسجيل ردّ فعل منتوج يستطيع كنت استعملت فورا في ثاني طاق cDNA تأليف ردّ فعل أو خزّنت في -20°C ل بعض من أسبوع. لتخزين طويل، أوصيت -70°C.
II. PCR تضخيم من أوّل طاق cDNA
المنتوج من الأوّل طاق cDNA تأليف يستطيع كنت استعملت مباشرة في PCR أو qPCR. الحجم من أوّل طاق cDNA تأليف ردّ فعل خليط سوفت لا comprize أكثر من 1/10 من الإجماليّ PCR ردّ فعل حجم. عادة، 2 استعملت μl من الأوّل طاق cDNA تأليف ردّ فعل خليط كطبعة ل PCR لاحق في 50 μl حجم الاجمالي.
Dongsheng Biotech عرض sery مختلف منتوج أن يساعد أنت حقّقت PCR نجاح. لأنزيم، نا Taq يزوّد polymerase، HS Taq dna polymerase، FS Taq dna polymerase، Pfu dna polymerase وإنصهار Pfu dna polymerase حالة إخلاص عال، فعّال، حساسية PCR أداء. نحن أيضا نتلقّى طويل Taq dna polymerase لطويل PCR أداء.
