 |
سريع dna مكتبة prep عدة V2 K001S-A، K001S-B
تفاصيل المنتج:
| مكان المنشأ: | الصين |
| اسم العلامة التجارية: | GDSBio |
| إصدار الشهادات: | ISO9001, ISO13485 |
| رقم الموديل: | K001S-A، K001S-B |
شروط الدفع والشحن:
| الحد الأدنى لكمية: | 1 عدة |
|---|---|
| تفاصيل التغليف: | صغير يوزّع مجموعة أو شحن أو oem |
| وقت التسليم: | 8 عمل يوم |
| شروط الدفع: | L/C، D/A، D/P، T/T، ويسترن يونيون، MoneyGram |
| القدرة على العرض: | 1000 عدة لكلّ يوم |
|
معلومات تفصيلية |
|||
| مخزون: | نعم | قط. ما من.: | K001S-A، K001S-B |
|---|---|---|---|
| مواصفة: | K001S-A/24 rxns; K001S-B/96 rxns; عينة sack/6 rxns | مظهر: | أتمّت، ما من إتلاف |
| library type: | dna | يسلسل منصة: | Illumina |
| علامة تجاريّة يطبع: | مع علامة تجاريّة يطبع | نقل مجموعة: | يحزم |
| طاقة الإنتاجية: | 1000 عدة لكلّ يوم | تخزين شرط: | -20°C، مع شرعية فترة من 12 شهر. |
| تسليط الضوء: | GDSBio مستهلك حمى أخذ عيّنة أنبوب,صنف i مستهلك حمى أخذ عيّنة أنبوب,100% نيلون حمى أخذ عيّنة أنبوب,Class I Disposable Virus Sampling Tube,100% Nylon virus sampling tube |
||
منتوج وصف
سريع dna مكتبة prep عدة V2
[منتوج إسم]
سريع dna مكتبة prep عدة V2
[قط. ما من. /Spec.]
K001S-A/24 rxns; K001S-B/96 rxns; عينة sack/6 rxns
[منتوج وصف]
يتّجه Illumina يزوّد طلعة جوّيّة يسلسل منصة، هذا عدة ملائم وعالميّ dna مكتبة بناء خطة في واحد أنبوب. هو يضمّ نهاية إصلاح و équeutage داخل واحد خطوة، للغاية يوجز الوقت من مكتبة بناء ويقلّل الخطأ يسبّب ب steps مضجر. النهاية تحضير، مهايئة عمليّة ربط، تضخيم وتطهير من ال يفتّت dna double-stranded يستطيع كنت أنجزت within about 2 ساعة. كامل مكتبة تكمية يستطيع كنت أنجزت ب dsDNA لاصف صبغ طريقة (e.g.، thermo Qubit سلك معزول مقياس فلوريّة) أو تكمية مطلق PCR بعد يخفّف المكتبة إلى تركيز مناسب.
[عينة نوع]
| تطبيق | عينة نوع | مبلغ الموصى به |
| كامل جينات يسلسل | جينات عالي الجودة معقّد | 50ng-1μg |
| هدف إعتقال يسلسل من exome كامل | جينات عالي الجودة معقّد | 10ng-1μg |
| هدف إعتقال يسلسل من جينات كامل | FFPE dna | ≥50ng |
| هدف إعتقال يسلسل من جينات كامل | cfDNA/ctDNA | ≥100pg |
| كامل جينات يسلسل | جينات microbial | 1ng-1μg |
| كامل جينات يسلسل (libre) | dna عالي الجودة |
≥50ng (ما من حجم إنتقاء) ≥200ng (حجم إنتقاء) |
| Seq | chip dna | ≥100pg |
| Targeted يسلسل | Amplicon | ≥100pg |
[تخزين شرط & رصيف صخري حياة]
كلّ كاشف سوفت كنت خزّنت في -20°C. عمليّة ربط مصد عاديّ لبلور أن يعجّل في درجة حرارة منخفض، هو سوفت كنت وازنت إلى درجة حرارة room قبل إستعمال. المنتوج شرعيّ ل 12 شهر.
[عنصر]
| عنصر | 24 rxns | 96 rxns |
| نهاية إصلاح & équeutage أنزيم مزيج | 120 μl | 2×240 μl |
| نهاية إصلاح & équeutage مصد | 240 μl | 2×480 μl |
| سريع dna أنزيم رابط | 120 μl | 2×240 μl |
| سريع عمليّة ربط مصد | 600 μl | 4×600 μl |
| 2× hifi مكتبة PCR سيد مزيج | 600 μl | 4×600 μl |
| Mix* مبتدأ | 120 μl | 480 μl |
* إن يكون هناك أكثر من واحد عينة، #K002 و #K003 مهايئة كبسولة تفجير مزيج أوصيت. يزوّد هذا عدة مجموعة الكبسولة تفجير مع فهرسة.
بطاقة: يوصي إنتقاء خرزة: #NC1011 GDSPure dna إنتقاء Magbeads أو AMPure XP خرزة.
[بطاقة]
1. نحن نقدّم إثنان نوع من عالميّ مهايئة كبسولة تفجير يثبت (GDS مهايئة، #K002 و #K003، يشتري على حدة)، غير أنّ زبون يستطيع أيضا اخترت من آخر صاحب مصنع أو يصطنع هم خاصّة مهايئة ل Illumina يسلسل منصة. سيقود كثيرا جدا مهايئة إلى التشكيل من مهايئة مبلمر ثنائيّ جزيء، ومهايئة غير كاف سيقود إلى منخفض مكتبة إنتاج. لذلك، مناسب مهايئة يحدّد تركيز التركيز ونوعية المكتبة. ال يوصي مهايئة أبديت تركيز لمبلغ مختلف من dna مدخل في الطاولة تالي:
طاولة 1 يوصي إستعمال تركيز المهايئة
| dna مدخل | يوصي conc. لمهايئة | مهايئة: أدخلت عميل Ratio* | GDS مهايئة تخفيف درجة |
| 1μg | 10μM | 10:1 | ما من تخفيف |
| 500ng | 10μM | 20:1 | ما من تخفيف |
| 250ng | 10μM | 40:1 | ما من تخفيف |
| 100ng | 7.5μM | 100:1 | 3:4 |
| 50ng | 5μM | 200:1 | 1:2 |
| 25ng | 2.5μM | 200:1 | 1:4 |
| 1ng | 1μM | 200:1 | 1:10 |
* مهايئة: ملحقة عميل يحيل نسبة النسبة من المهايئة رقم جزيئيّ غراميّ من آخر مصدر إلى المدخل dna رقم جزيئيّ غراميّ، أيّ يستطيع كنت تقريبا حسبت ب يحيل الصيغة تالي:
يدخل dna رقم (pmol) ≈Input dna كتلة (ng)/[0.66×Input dna طول معدّل (bp)]
*The يأثر نوعية وتركيز من المهايئة للغاية الإنتاج من المكتبة، خصوصا لمنخفض مدخل مكتبة. المهايئة من مصدر عالي الجودة سوفت كنت انتقيت وخفّفت إلى تركيز مناسب مع 0.1×te قبل عمليّة ربط. ضمنت لإستعمال فوريّ، أنّ كلّ عينة إضافة ثابت 5 μl، تفاديت عينة إضافة خطأ، وحاولت أن يتفادى يكرّر freeze-thaw.
2. الأنزيم يستعمل في 2× hifi مكتبة PCR سيد مزيج b أسرة dna polymerase، أيّ يتلقّى 5“- 3”polymerase و3“- 5”exonuclease نشاط، غير أنّ يفتقر 5“- 3”exonuclease نشاط. هو يتلقّى عال حالة إخلاص وتجانسية، وقوّيّ قابل للمحافظة تأليف قدرة. رقابة صارمة من الرقم من تضخيم دورة بشكل خاصّ مهمّ لمكتبة إنتاج. يبدي الطاولة تالي ال يوصي رقم من تضخيم دورة يماثل إلى مبلغ مختلف dna يدخل:
طاولة 2 يوصي رقم من تضخيم دورة يماثل إلى مختلف عينة مدخل
| مدخل dna | يوصي رقم من تضخيم دورة | |
| 100ng مكتبة | 1μg مكتبة | |
| 1μg | 0 | 2-5 |
| 500ng | 0 | 2-5 |
| 250ng | 1-3 | 5-7 |
| 100ng | 2-4 | 6-8 |
| 50ng | 4-6 | 8-10 |
| 25ng | 5-7 | 9-12 |
| 10ng | 7-9 | 11-13 |
| 5ng | 9-11 | 13-14 |
| 2.5ng | 10-12 | 14-16 |
| 1ng | 11-13 | 15-17 |
بطاقة: 1. يبدي الطاولة آنف النتائج الاختبار يستعمل 150bp dna معياريّ، أيّ يكون لمرجع فقط.
2. إن استعملت وصلة ناقص يكون، عدد الأدنى الدورة (1-3) سوفت كنت ضخّمت أن ينال مكتبة كامل.
3. إن يكون النوعية من المدخل dna فقير، أو الحجم إنتقاء يكون وفيت أثناء المكتبة بناء، الرقم من تضخيم دورة سوفت كنت بشكل مناسب زدت.
[معياريّ مكتبة بناء عملية]
نهاية إصلاح
بطاقة: إن يتجاوز ال يفتّت dna 45 μl قبل هذا خطوة، أو المصد يكون متعارض مع النهاية إصلاح مصد، مغنطيسيّ خرزة تطهير سوفت كنت أنجزت أوّل.
1. أعدّت الردّ فعل تالي في 200 μl PCR أنبوب:
| كاشف | حجم |
| يفتّت dna | متغيّر |
| نهاية إصلاح & équeutage أنزيم مزيج | 5 μl |
| نهاية إصلاح & équeutage مصد | 10 μl |
| ddH2 o | To 65 μl |
2. يطرد دوامة بلطف وتدويم إلى أسفل بإيجاز أن يمزج جيّدا، بإيجاز ويجمع all the سائل إلى القعر من الأنبوب.
3. أنجزت الردّ فعل تالي في cycler حراريّ:
| درجة حرارة | وقت |
| 20°C | 15min |
| 65°C | 15min |
| 4°C | ∞ |
مهايئة عمليّة ربط
1. باشرت مع العمليّة ربط ردّ فعل في أسرع وقت ممكن بعد نهاية تحضير.
2. خفّفت المهايئة وفقا ل طاولة 1.
3. أعدّت التالي ردّ فعل نظام:
| كاشف | حجم |
| نهاية إصلاح و équeutage منتوج | 65 μl |
| سريع عمليّة ربط مصد | 25 μl |
| سريع dna أنزيم رابط | 5 μl |
| مهايئة x | 5 μl |
| مجموع | 100 μl |
4. يطرد دوامة بلطف وتدويم إلى أسفل بإيجاز أن يمزج جيّدا، بإيجاز ويجمع all the سائل إلى القعر من الأنبوب.
5. أنجزت الردّ فعل تالي في cycler حراريّ:
| درجة حرارة | وقت |
| 20°C | 15min |
| 4°C | ∞ |
يوصي حل ل PCR تنظيف/حجم إنتقاء (الخاصّ مغنطيسيّ خرزة حجم سوفت كنت كيّفت وفقا ل الحقيقيّ عينة حجم)
1. أعدّت 100 μl عمليّة ربط منتوج داخل مناسب نابذة أنبوب.
2. أضفت 100 μl من يعلق dna إنتقاء خرزة مغنطيسيّ إلى العينة. بلطف فجّرت مع ماصّة ل 10 وقت (أو دوامة ل 30 s). حضنت عينة ل 5 min في درجة حرارة room.
3. وضعت الأنبوب على منصب جريدة مسنّنة مناسب مغنطيسيّ أن يفصل الخرزة من المادّة طافية. أزلت عندما الحل واضح، بعناية ونبذت المادّة طافية مع ماصّة (لا ينبذ خرزة).
4. أضفت 200 μl من 80% إيثانول freshly prepared إلى الأنبوب بينما في المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. لا يزعج حضنت في درجة حرارة room ل 30 s، وبعد ذلك بعناية أزلت ونبذت المادّة طافية (خرزة).
5. كرّرت خطوة 4 مرّة لمجموع من إثنان غسل.
بطاقة: يوقن أن يزيل كلّ سائل مرئيّ بعد الثاني wash.
6. air dry الخرزة إلى أن يتلقّى السطح من الخرزة مغنطيسيّ ما من لمعان واضح بينما الأنبوب يكون على المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ مع الغطاء مفتوح.
بطاقة: يتمّون لا overdry الخرزة، هذا يمكن نتجت في إستعادة lower dna. عندما يبدأ الخرزة أن ينصدع، هم أيضا جافّ.
7. أزلت الأنبوب من المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. أضفت 22 μl تصفية تتابعيّة مصد (10mM Tris-HCl، pH8.0-8.5) إلى الأنبوب. مزجت جيّدا ب pipette عبر على الأقل 10 وقت أو على دوامة خلاط ل 30 يحضن s. ل 3-5 min في درجة حرارة room.
8. وضعت الأنبوب على المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. نقلت بعد 5 min (أو عندما الحل واضح)، 20 μl مادّة طافية إلى أنبوب جديد. أتمّت الإنتقاء، وال ينتقي dna يستطيع كنت استعملت لتجربة لاحق أو خزّنت في -20°C لفترة طويلة.
مكتبة تضخيم
1. أعدّت الردّ فعل تالي في 200 μl PCR أنبوب:
| كاشف | حجم |
| عمليّة ربط منتوج بعد تنظيف أو حجم إنتقاء | 20 μl |
| 2× hifi مكتبة PCR سيد مزيج | 25 μl |
| مزيج مبتدأ | 5 μl |
| مجموع | 50 μl |
2. يطرد دوامة بلطف وتدويم إلى أسفل بإيجاز أن يمزج جيّدا، بإيجاز ويجمع all the سائل إلى القعر من الأنبوب.
3. أنجزت الردّ فعل تالي في cycler حراريّ:
| درجة حرارة | وقت | دورة رقم |
| 95°C | 3min | 1 |
| 98°C | 20sec |
انتقيت عدد المناسب الدورة وفقا ل طاولة 2 |
| 60°C | 15sec | |
| 72°C | 30sec | |
| 72°C | 5min | 1 |
| 4°C | ∞ | - |
يوصي حل ل PCR تنظيف/حجم إنتقاء (الخاصّ مغنطيسيّ خرزة حجم سوفت كنت كيّفت وفقا ل الحقيقيّ عينة حجم)
1. أعدّت 50 μl عمليّة ربط منتوج داخل مناسب نابذة أنبوب.
2. أضفت 45 μl من يعلق dna إنتقاء خرزة مغنطيسيّ إلى العينة. بلطف فجّرت مع ماصّة ل 10 وقت (أو دوامة ل 30 s). حضنت عينة ل 5 min في درجة حرارة room.
3. وضعت الأنبوب على منصب جريدة مسنّنة مناسب مغنطيسيّ أن يفصل الخرزة من المادّة طافية. أزلت عندما الحل واضح، بعناية ونبذت المادّة طافية مع ماصّة (لا ينبذ خرزة).
4. أضفت 200 μl من 80% إيثانول freshly prepared إلى الأنبوب بينما في المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. لا يزعج حضنت في درجة حرارة room ل 30 s، وبعد ذلك بعناية أزلت ونبذت المادّة طافية (خرزة).
5. كرّرت خطوة 4 مرّة لمجموع من إثنان غسل.
بطاقة: يوقن أن يزيل كلّ سائل مرئيّ بعد الثاني wash.
6. air dry الخرزة إلى أن يتلقّى السطح من الخرزة مغنطيسيّ ما من لمعان واضح بينما الأنبوب يكون على المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ مع الغطاء مفتوح.
بطاقة: يتمّون لا overdry الخرزة، هذا يمكن نتجت في إستعادة lower dna. عندما يبدأ الخرزة أن ينصدع، هم أيضا جافّ.
7. أزلت الأنبوب من المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. أضفت 22 μl تصفية تتابعيّة مصد (10mM Tris-HCl، pH8.0-8.5) إلى الأنبوب. مزجت جيّدا ب pipette عبر على الأقل 10 وقت أو على دوامة خلاط ل 30 يحضن s. ل 3-5 min في درجة حرارة room.
8. وضعت الأنبوب على المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. نقلت بعد 5 min (أو عندما الحل واضح)، 20 μl مادّة طافية إلى أنبوب جديد. أتمّت الإنتقاء، وال ينتقي dna يستطيع كنت خزّنت في 2-8°C ل 1-2 أسبوع أو خزّنت في -20°C لفترة طويلة.
[ملحق] يوصي خطة لإنتقاء double-Sided
إن تطلّبت إنتقاء rond يكون، نحن نزوّد الخطة تالي أن ينتقي المناسب مغنطيسيّ خرزة حجم وفقا ل ال يتوقّع مكتبة حجم. الحجم إنتقاء يستطيع كنت أنجزت قبل نهاية إصلاح أو بعد تضخيم. سيقلّل إثنان أو أكثر إنتقاء rond للغاية المكتبة عائد ماليّ.
ملأت المكتبة حجم في الطاولة أدناه إلى 100 μl. انتقيت الحجم من خرزة مغنطيسيّ في إثنان دورة وفقا ل ال يتوقّع مكتبة حجم. ووفيت الإنتقاء عملية وفقا ل التعليم تالي.
طاولة 3 مبلغ الموصى به من خرزة مغنطيسيّ لإنتقاء rond
| يتوقّع مكتبة حجم | 150bp | 200bp | 250bp | 300bp | 400bp | 500bp | 600bp | 700bp | |
| حجم الخرزة (μl) | حول 1 | 100 | 90 | 80 | 70 | 60 | 55 | 50 | 45 |
| حول 2 | 30 | 20 | 20 | 20 | 20 | 15 | 15 | 15 | |
1. ملأت المكتبة حجم إلى 100 μl في 200μl PCR أنبوب ويعلم ك A. إضافة يحضن حجم مؤكّد من خرزة مغنطيسيّ وفقا ل الطاولة 3 (حول 1) إلى الأنبوب A. Gently ضرب مع ماصّة ل 30 s. عينة ل 5 min في درجة حرارة room.
2. وضعت الأنبوب a على منصب جريدة مسنّنة مناسب مغنطيسيّ أن يفصل الخرزة من المادّة طافية. أزلت عندما الحل واضح، بعناية المادّة طافية إلى أنبوب جديد وعلمت هو ك B. منبوذ خرزة.
3. أضفت حجم مؤكّد من خرزة مغنطيسيّ وفقا ل الطاولة 3 (حول 2) إلى الأنبوب B. Gently ضرب مع ماصّة ل 30 s. يحضن عينة ل 5 min في درجة حرارة room. وضعت الأنبوب b على منصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. أزلت عندما الحل واضح، بعناية ونبذت المادّة طافية.
4. أضفت 200 μl من 80% إيثانول freshly prepared إلى الأنبوب b بينما في المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. لا يزعج حضنت في درجة حرارة room ل 30 s، وبعد ذلك بعناية أزلت ونبذت المادّة طافية (خرزة).
5. كرّرت خطوة 6 مرّة لمجموع من إثنان غسل.
بطاقة: يوقن أن يزيل كلّ سائل مرئيّ بعد الثاني wash.
6. air dry الخرزة إلى أن يتلقّى السطح من الخرزة مغنطيسيّ ما من لمعان واضح بينما الأنبوب b يكون على المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ مع الغطاء مفتوح.
بطاقة: يتمّون لا overdry الخرزة، هذا يمكن نتجت في إستعادة lower dna. عندما يبدأ الخرزة أن ينصدع، هم أيضا جافّ.
7. أزلت الأنبوب b من المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. أضفت 22 μl تصفية تتابعيّة مصد إلى الأنبوب. مزجت جيّدا ب pipette عبر على الأقل 10 وقت أو على دوامة خلاط ل 30 يحضن s. ل 3-5 min في درجة حرارة room.
بطاقة: إن سينجز يستهدف إعتقال لن يكون، أضفت تصفية تتابعيّة مصد (10mM Tris-HCl، ph 8.0-8.5) لتصفية تتابعيّة. خلاف ذلك، يطهّر ultrapure ماء سوفت كنت استعملت لتصفية تتابعيّة.
- وضعت أنبوب b على المنصب جريدة مسنّنة مغنطيسيّ. إنتقال 20 μl مادّة طافية إلى أنبوب جديد.
لبحث إستعمال فقط
